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抗体纯化的四个免疫磁珠 :
Protein A beads、 Protein G beads、 Protein A/G beads、 Protein L beads
1. Protein A
o 定义与来源:Protein A 是一种从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)细胞壁分离出来的蛋白质。它能够特异性地结合哺乳动物 IgG(免疫球蛋白 G)的 Fc 区域。
o 结构特点:它是一种多结构域的蛋白质,其结合 IgG 的结构域具有高度保守性。这些结构域能够以一种稳定且特异的方式与 IgG 相互作用。
o 应用领域:在生物医学研究和生物技术领域应用广泛。例如,在抗体纯化过程中,将 Protein A 固定在层析介质上,当含有抗体的样品通过时,抗体的 Fc 段与 Protein A 结合,而其他杂质则被洗脱,然后通过改变洗脱条件(如改变 pH 值或离子强度)就可以将纯化的抗体洗脱下来。这种方法可以高效地从血清、细胞培养上清等复杂样品中分离和纯化 IgG 抗体。
2. Protein G
o 定义与来源:Protein G 主要来源于链球菌(Streptococcus)。它也能与 IgG 结合,但其结合特性与 Protein A 有所不同。
o 结构特点:具有多个 IgG - binding domains,对不同亚类 IgG 的结合亲和力和特异性与 Protein A 存在差异。例如,Protein G 对某些物种的 IgG 亚类(如小鼠 IgG1)的结合能力比 Protein A 强。
o 应用领域:在抗体纯化中同样是重要的工具。当需要纯化一些 Protein A 结合效果不佳的 IgG 亚类时,Protein G 就发挥了优势。而且在免疫沉淀实验中,它可以帮助捕获和富集抗原 - 抗体复合物,从而有助于研究蛋白质之间的相互作用。
3. Protein A/G
o 定义与来源:Protein A/G 是一种基因工程融合蛋白,它结合了 Protein A 和 Protein G 的 IgG - binding domains 的优点。
o 结构特点:通过基因工程技术构建,融合了两种蛋白的 IgG 结合结构域,使其能够结合更广泛种类和亚类的 IgG。它可以识别多种哺乳动物 IgG,包括人、小鼠、大鼠等物种的不同 IgG 亚类。
o 应用领域:在抗体纯化和免疫检测方面非常有用。由于其能够结合多种 IgG,在处理含有不同物种或不同 IgG 亚类的混合样品时,使用 Protein A/G 可以提高抗体捕获的效率和通用性。例如,在从含有多种抗体的生物样本库中大规模纯化抗体时,Protein A/G 层析柱可以更有效地捕获目标抗体。
4. Protein L
o 定义与来源:Protein L 主要来源于大消化链球菌(Peptostreptococcus magnus)。它是一种能够结合抗体的蛋白质,但与 Protein A 和 Protein G 的结合方式不同。
o 结构特点:它主要结合抗体的轻链(κ 链),而不是 Fc 区域。这种结合特性使得它能够识别更广泛的抗体类型,包括一些 IgM、IgA 等,因为这些抗体也含有 κ 轻链。
o 应用领域:在研究一些特殊抗体或者抗体片段时非常有价值。比如,在筛选和研究含有 κ 轻链的单克隆抗体库时,Protein L 可以作为一种有效的捕获工具。它还可以用于从复杂的生物样品中分离含有 κ 轻链的抗体,用于后续的结构和功能研究。
1. Protein A 磁珠
o 原理
o Protein A 磁珠是将 Protein A 固定在磁性微球表面而形成的。其核心原理是利用 Protein A 能够特异性结合哺乳动物 IgG 的 Fc 区域这一特性。当含有抗体的样品与 Protein A 磁珠混合时,抗体的 Fc 段会与磁珠表面的 Protein A 结合,而在磁场的作用下,磁珠可以方便地从溶液中分离出来,从而实现抗体的快速富集和纯化。
应用场景
o 抗体纯化:从血清、腹水或者细胞培养上清等复杂的生物样品中纯化 IgG 抗体。例如,在单克隆抗体的生产过程中,从杂交瘤细胞培养上清中分离出高纯度的 IgG 单克隆抗体。
o 免疫沉淀(IP):用于捕获与目标抗体相互作用的抗原。通过将抗体与 Protein A 磁珠结合,然后加入含有抗原的样品,形成抗体 - 抗原复合物,再利用磁场分离出复合物,经过后续的洗脱步骤就可以对抗原进行鉴定和分析,这对于研究蛋白质 - 蛋白质相互作用非常重要。
优势
o 高效性:可以快速地结合抗体,在短时间内实现对抗体的富集。而且磁珠的比表面积较大,能够结合较多的抗体。
o 便捷性:磁性分离方式操作简单,不需要复杂的离心或者过滤步骤,减少了样品损失和操作时间。
Protein G 磁珠
原理
o 与 Protein A 磁珠类似,Protein G 磁珠是把 Protein G 固定在磁珠表面。基于 Protein G 对 IgG 的特异性结合能力,特别是对某些 IgG 亚类(如小鼠 IgG1)有更强的结合亲和力,从而实现抗体的分离和富集。
应用场景
o 抗体亚类特异性纯化:在处理一些 Protein A 结合效果不好的 IgG 亚类时发挥优势。比如在研究小鼠单克隆抗体时,对于小鼠 IgG1 亚类的抗体纯化,Protein G 磁珠是很好的选择。
o 免疫共沉淀(Co - IP):用于研究蛋白质复合物。当研究涉及到一些特殊 IgG 亚类抗体介导的蛋白质相互作用时,Protein G 磁珠可以有效地捕获抗体 - 抗原复合物,帮助解析蛋白质之间的相互作用网络。
优势
o 特异性结合优势:对于特定 IgG 亚类有更好的结合能力,能够更精准地纯化和捕获相关抗体。
o 稳定性好:磁珠本身化学性质稳定,在不同的缓冲液条件下能够保持较好的性能,有利于在各种实验环境中使用。
Protein A/G 磁珠
原理
o Protein A/G 磁珠是结合了 Protein A 和 Protein G 的 IgG - binding domains 优势的磁珠。通过基因工程手段构建的融合蛋白固定在磁珠表面,使其能够结合更广泛种类和亚类的 IgG,利用了两种蛋白对不同物种和亚类 IgG 的结合特异性。
应用场景
o 多物种抗体纯化:在处理含有多种哺乳动物(如人、小鼠、大鼠等)抗体的混合样品时非常有效。例如,在生物样本库或者多物种抗体研究项目中,需要同时纯化不同物种的抗体,Protein A/G 磁珠可以提高纯化效率。
o 高通量抗体筛选:在大规模筛选抗体的实验中,由于其广泛的 IgG 结合能力,可以快速地从众多抗体中筛选出目标抗体,减少因抗体结合特异性差异导致的筛选遗漏。
优势
o 广泛的结合能力:能够结合多种 IgG,增加了其通用性。在不知道抗体具体亚类或者物种来源的情况下,Protein A/G 磁珠是一个很好的选择。
o 高效的抗体捕获:结合了 Protein A 和 Protein G 的优点,提高了抗体捕获效率,能够在复杂的样品环境中有效地富集抗体。
Protein L 磁珠
原理
o Protein L 磁珠是将 Protein L 固定在磁性微球上。Protein L 主要结合抗体的轻链(κ 链),所以当含有抗体的样品与 Protein L 磁珠接触时,抗体的 κ 轻链与磁珠表面的 Protein L 结合,通过磁场分离实现对含有 κ 轻链抗体的富集。
应用场景
o 特殊抗体筛选和研究:在筛选和研究含有 κ 轻链的单克隆抗体库时,Protein L 磁珠是有力的工具。例如,在构建和筛选新型 κ 轻链单克隆抗体的过程中,可以利用 Protein L 磁珠快速富集和分离目标抗体。
o IgM 和 IgA 相关研究:因为 IgM 和 IgA 等抗体也含有 κ 轻链,在研究这些抗体或者利用这些抗体进行免疫检测等实验时,Protein L 磁珠可以用于它们的分离和富集。
优势
o 独特的结合特性:能够识别和结合多种含有 κ 轻链的抗体,拓宽了抗体研究的范围,尤其是对于一些非传统 IgG 抗体的研究。
o 温和的分离条件:在结合和洗脱过程中,通常可以采用相对温和的条件,减少对抗体结构和功能的破坏,有利于后续的抗体活性检测和应用。
粒度生物磁珠系列产品是由NHS活化的磁性羧基微球与Protein A or Protein G or Protein A/G or Protein L共价结合形成的复合微粒。与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比,该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,洗脱条件更均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。本产品为微纳米级磁性微球,熟练操作可在15 min内完成抗体吸附过程,30 min内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用,适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化,也可用于抗体固定及其它相关研究。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。
本公司提供四种蛋白的选择,同时也提供两种粒径的磁珠选择,分别是200nm和1000nm。其余粒径的磁珠可以定制(50nm~10μm)。