[二步法] 适用于敏感抗体(配体)
1. 将 MM101 通过涡旋或者超声作用分散,得到均匀的分散液。取用所需量 的微球(例如 10mg)加入容器中,加水稀释至 10mg/mL 。
2. 将容器置于磁性分离器分离 1 分钟(必要时延长分离时间),待完全分 离后吸除液体。
3. 加入 1 mL 偶联反应液,将微球重新涡旋(超声)分散均匀。
4. 加入 100μL 偶联剂,涡旋(超声)分散均匀。
5. 将容器置于翻转混匀器,继续在室温下反应 30 分钟。
6. 按照步骤 2 中的方法除去液体。
7. 加入 1 mL 偶联反应液,将微球重新涡旋(超声)分散均匀。
8. 加入 200μg 抗体,涡旋(超声)分散均匀。
9. 在翻转混匀器上继续于室温下反应 3 小时。
10. 按照步骤 2 中的方法除去液体。
11. 加入 1mL 的清洗液,并涡旋(超声)分散均匀。
12. 按照步骤 2 中的方法除去液体。
13. 重复步骤 11-12 共计 4 次。
14. 选用合适的缓冲液将微球重新分散,并在 2-8℃下保存。
清洗液: TBS-T (25 mM Tris-HCl 缓冲液, pH 7.2, 0.15 M NaCl, 0.05 % Tween20) 偶联剂: 10 mg/mL EDC 以及 15 mg/mL NHS 用偶联反应液一并溶解, 现用现配。(EDC: 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐,NHS:N羟基琥珀酰亚胺)
装置: 磁性分离器,超声清洗器,涡旋混合仪,翻转混匀器。