羧基磁性微球表面偶联蛋白方案
【蛋白 偶联羧基磁性微球实验步骤】
1、取 10 mg 磁性微球至离心管中，磁分离去除上清，加入 MES（0.015M pH=5.0）1mL 重悬，水浴超声 20秒。磁分离，弃上清，加入 1 mL MES（0.015M pH=5.0）重悬，并水浴超声 20 秒，定容到 10mg/mL（重悬至 1 mL）；
2、涡旋加入 0.35 mg 蛋白，震荡混匀后，置于 37℃控温摇床中振荡 30 min；
3、称取 10 mg EDC，将吸附 SA 的磁珠直接加入到 EDC 中，振荡混匀后，水浴超声 20s，继续在摇床中振荡 5 h。
4、磁分离后留取 1 mL 上清测紫外吸光度，并计算上清中 SA 的含量；
5、加入 1 mL 的 CB（0.1M pH=9.0）溶液重悬磁珠，水浴超声 20s，摇床振荡 30 min，磁分离，上清留测紫外，并计算上清中 蛋白 的含量；
6、加入 1 mL 的 PBST（0.015M pH=7.4 含 1%Tween-20）溶液重悬磁珠，水浴超声 20s，摇床振荡过夜，磁分离，上清留测紫外，并计算上清中 SA 含量，通过投料量和累积上清 SA 含量计算出 SA 的偶联率。
7、在第 2 下午 15:30-16:30，第 3 天的早上 8：00-9:00 间，和下午 15:30-16:30 间各更换一次 PBST（0.015MpH=7.4 含 1%Tween-20），更换后水浴超声 20 s。于第三天第 2 次将磁珠取出，磁分离去除上清。
8、加入磁珠保存液（PBST+1%BSA+0.1%NaN3）重悬磁珠，定容至 10 mg/mL。