封闭试剂
封端剂通常涂覆在小珠(通过吸附)偶合反应如下。这些化合物所使用,以减少样品中的涂覆的磁珠与非靶标分子之间的非特异性相互作用(蛋白质和聚合物表面之间如疏水相互作用)。所述封闭剂应仔细选择,以确保它是有效的最小化非特异性相互作用;某些封闭剂可能会干扰测试/测定中,或实际上促成了非特异性结合。封闭剂浓度进行评估,以确保有足够的阻塞(尤其是 在光捕获分子的涂层水平),没有活性的明显损失的。封闭剂通常添加到存储缓冲器中的不同量的标准浓度为从0.05%到0.1%(重量/体积)。在更高浓度阻滞剂(达1%)的单独孵育还建议存储之前,以饱和的微球体的暴露表面。一些常用的封闭剂包括:
A。BSA(牛血清白蛋白):通常单独使用,但可以与其他阻滞剂结合起来,最常用的表面活性剂。
B。酪蛋白:一种基于乳的蛋白质,含有原生物素,其应当与涉及生物素,以防止干扰系统时,应注意避免。
C。 Pepticase(酪蛋白酶解产物):酪蛋白的酶促衍生物,它也应该与涉及生物素系统工作时避免。
D。非离子表面活性剂:吐温20和Triton™X-100是典型的。
当与另一种封闭剂使用的,常见的比例是1%封闭剂; 0.05%的表面活性剂。
E。IgG:缀合特异性IgG,以微球时经常使用。例如,如果耦合小鼠IgG,兔(或任何非交叉反应的抗体)可以吸附作为封闭剂。
F。 FSG(鱼皮明胶):纯明胶或明胶水解产物也可使用。
克。 PEG(聚乙二醇):一个非常多才多艺的拦截器,在一些规模(MW,链长),配置及收费用。
H。血清:非交叉反应血清,如马或鱼血清,都是在交叉反应的各种类型的抗体的术语高度惰性的。
I。商业阻滞剂:许多公司提供制剂,其是各种分子量的两种或更多种单封闭物质的复合物,并且其可以有效地在宽范围的条件下使用。这些不同的商品名称出售,而大多数化学厂商将推出多种。
有许多额外的封闭剂,因此我们建议尝试用不同的组合和浓度。